抗菌药物筛选技术可以在抗菌功效快速高效地提供信息。原则和实践的方法有很大的差异,各有不同的优点和缺点。这个页面提供信息在多个筛查方法,分为三类:常规筛选方法、技术驱动的化验,缩小版本的标准方法。
请注意,有一个很大的区别抑制微生物的生长和在短时间内杀死微生物。下面列出的许多筛选技术测量只抑制微生物的生长。抑制经济增长并不总是可靠的代理杀生的功效(杀死的微生物)。考虑酒精、漂白剂和环丙沙星抗生素为例:酒精和漂白剂都被认为是杀生的,但是在一个inhibition-focused分析他们会得第二和第三环丙沙星,产生很强的抑制作用,但相对较少的杀生的效果。这些活性物会因此“错过”inhibition-focused抗菌筛查。因此,作为一般规则,如果微生物抑制目标inhibition-based方法应该使用。如果微生物杀死目标筛选方法与杀生的疗效端点是优越的。
传统的筛选方法
抑制或Disk-Diffusion测试区(ZOI),也被称为Kirby-Bauer测试
这种技术利用纸磁盘与抗菌剂浸泡,然后放置在琼脂板已经播种生长细菌或真菌的“草坪”。这种方法通常用于评估抗生素耐药性的细菌和真菌。区域经济增长的抑制作用越大,力量越大抗生素是已知的。
抑制区测试可用于屏幕抗菌产品的功效。它是快速,相对便宜,戏剧性的视觉端点。可以测量每个区域的直径的抑制(公约来衡量在毫米)生产定量数据。
琼脂的干燥,磁盘的加载速率和水溶性的抗微生物剂都能有助于抑制带的大小差异。
最低抑制浓度(MIC)
最常用的定向抗菌药物筛选技术的最低抑制浓度测试。方法利用微量滴定板,塑料盘子96口井,384井1536口井。大多数微量滴定板与96年合同微生物实验室工作,组织产品在每个8行跨12列。
对于这个测试,产品连续稀释接种井,通常由列从左到右,从使用多通道吸量器。实验室通常离开房间的积极的和消极的控制终端列。肉汤稀释后,增长增加了井。抗菌产品的稀释系列创建一个梯度浓度。孵化后,浊度(多云的微生物生长的证据)是在稀井和清晰的看到汤(增长)的预防是更为集中观察井。第一个浓度增长是防止被称为产品的最低抑制浓度。
最低杀菌浓度(MBC)
最低杀菌浓度测试用于确定抗微生物剂的浓度对杀生的影响细菌。测试是在相同的方式进行上述麦克风测试,但是一段时间后在研究者的自由裁量权,井通过中和媒体和镀琼脂稀释量化幸存的细胞。如果non-inhibited井的接触时间是足够长的时间来演示云由于生长的细菌,然后只有那些井上方的麦克风需要镀琼脂。传统细菌浓度减少99.9%被认为是杀生的。因此,MBC是最大的稀释,观察到细菌的水平减少99.9%。
棋盘筛选
所谓的棋盘筛选化验都是有用的工具来评估各种抗菌药物的组合的影响。他们是用来评估协同和拮抗作用。他们通常作为麦克风进行化验,而是抗菌浓度梯度在行从左到右或从上到下在列,它们是在两个方向上运行不同的抗菌药物(如用8种不同的代理装入行和稀释,然后一个代理加载所有列和稀释)。这使研究者能够观察意想不到的,明显的抗菌效应大稀释以及拮抗效应较低的稀释。
琼脂稀释法
琼脂稀释法检测可用于筛选一个或几个抗菌药物在一系列类型的细菌。对于这些化验,琼脂准备包含各种浓度的抗菌剂,那么不同的细菌琼脂和孵化评估增长。使用这种技术,它是快速和容易屏幕几十个甚至几百个不同类型的细菌,抑制由给定抗菌浓度在一个或几个。
液态Time-Kill测试
液体time-kill化验相对容易进行实验室和产量高质量数据杀生的抗菌药物的影响。对于这些测试,抗菌剂被加载到一个小管或瓶,通常为1毫升或10毫升,一个相对较小的体积培养液添加,通常0.01毫升或0.1毫升,然后混合瓶,接触时间可以流逝,然后一部分瓶转移到琼脂中和镀介质和枚举。标准版本的测试,比如ASTM E2315。
基于地表Time-Kill测试
表面time-kill化验类似于液体time-kill化验,但抗微生物剂和微生物的反应发生在表面,这一层薄薄的微生物已经干了20至40分钟。这些测试通常为抗菌药物提供一个更大的挑战,因为代理必须穿透微生物膜除了杀死微生物。这种筛选试验的优点是数据关联的测试要求EPA和美国食品及药物管理局市场产品注册或批准。
技术驱动的化验
电性能测试
电性能测试利用一条材料嵌入一个梯度的抗菌剂,通常抗生素。测试是在相同的方式作为抑制区进行测试,而是一个圆形区域,看到一个椭球区。区相交的点antibiotic-containing地带是一个有用的测量能力。
ATP拭子
三磷酸腺苷(ATP)有时被称为生物能量的“货币”,因为所有的细胞,无论是人类,动物,植物,或单个细菌细胞,依赖ATP细胞过程。所以ATP是所有生物中发现除了病毒,并因此发现了一些使用抗菌药物筛选。ATP检测通常加上拭子,由擦表面,有或没有使用抗菌剂,然后比较ATP检测的数量。ATP测试使用的反应与发光生物体的ATP分子工具产生光信号的测试。这个信号由传感器检测,将检测到的光量转换为单位称光相对单位(RLU)。RLU变化通过ATP测试设备制造商,所以这些屏幕在本质上是相对的和最佳使用单一ATP测试平台进行。ATP测试被认为是“粗糙”筛选抗菌活性,因为微生物含有ATP与动物和食物细胞相比,相对较少,他们受制于其它来源的ATP在环境中(例如葡萄汁在传送带食品生产环境)。还应该记住破坏ATP不一定是象征死亡的微生物因为ATP筛查是混杂因素,如杀虫剂灭活酶负责信号,它可以出现在测试微生物的破坏。ATP检测筛选的主要优点是它快速,便宜,而且几乎不需要培训。至关重要的人使用这种技术使用更传统的微生物方法定期确认结果确认结果的有效性。
生物荧光检测
可以表达荧光蛋白转基因微生物在生长和新陈代谢。敏感的相机可以用来检测微弱光产生在增长,表明缺乏抑制抗菌药物。这些化验很难工程师和解释,但有一个物理检测端点的优势随着时间的推移和简单的观察效果。
Stratix实验室ReadyNow测试表面
抗菌测试本质上是变量,基于地表的抗菌和许多微生物常用的筛查开始死亡就接种到表面上。这代表一个点的变化检测。
一家名为Stratix实验室已经开发出了一系列的专利产品旨在解决这一问题,为研究人员提供pre-inoculated、病原学上确定的稳定测试表面进行测试和筛选。他们的产品将稳定的微生物种群被称为“ReadyNow。“这些产品也可以消除一些复杂性参与内部检查,尤其是对小排量或缺乏经验的实验室。ReadyNow pre-inoculated测试表面可以利用和枚举公司内部的一些微生物学专业知识,或利用实验室像Microchem来驱动结果的一致性,特别是在不同的实验室或测试网站。Stratix实验室和其产品的更多信息是可用的。
缩小或修改标准的抗菌测试方法
大多数抗菌产品开发人员都熟悉标准化方法用来衡量杀菌的功效的产品,如ASTM E1153洗手液测试方法,采用AOAC公认的Use-Dilution消毒剂的方法,或者是ASTM E1052方法测试杀病毒的功效。这些方法通常是运行在缩小的形式为“屏幕”,或小测试来衡量的功效更大的未来的研究,通常研究提交环保局或FDA。
缩小版本的标准方法
许多抗菌药物筛选的终极目标是识别产品,可以通过环保局所使用的标准化考试,FDA和其他产品注册和市场监管机构的批准。作为一般规则,越接近在测试设计方法是监管机构要求的标准化方法,更精确的检测数据,但更多的劳动密集型的研究。因此,按比例缩小版本的许多标准方法是常用的抗菌产品采用计通过最终的一系列测试的可能性,通常在GLP兼容测试条件下进行的。
下面的列表提供了一些常见的方法来减少这样的例子的方法
- 采用AOAC公认Use-Dilution测试- 10到30运营商(测试表面)中使用的典型60要求/,/微生物。
- 采用AOAC公认的杀菌喷剂产品测试- 10或30运营商(测试表面)使用的典型60每个很多,需要每微生物。
- 消毒巾测试- 10或30运营商(测试表面)中使用的典型60每个很多,需要每微生物。
- 非食品接触洗手液测试- 1或3运营商(测试表面)中使用的五个ASTM E1153指定的方法。
- 食品接触杀毒功能测试有两种方法用于这类说法,既不容易缩小。因此,构建产品通常运行non-GLP版本的测试将进行登记。
使用“最坏情况”测试条件筛选
另一种方式来减少劳动力参与抗菌测试同时生成有价值的信息是进行标准测试方法在一个所谓的“最坏情况”的方式。可以更改方法的示例来呈现他们“最坏情况”下面列出:
- 使用中最耐药微生物所需的面板测试——最耐药微生物对于一个给定的杀菌剂通常会随活性成分。常用的消毒剂,例如,作为一般规则金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌更难以通过比吗沙门氏菌血清。因此,筛选能做对铜绿假单胞菌提供有用的效果数据。
- 减少了接触时间。消毒的程度是一个产品的抗微生物剂的浓度和接触时间,所以筛选产品打算有一个5分钟的接触时间3分钟提供有用的信息和对冲在测试失败带来的监管机构更多的复制和批量测试。
正如您可以看到的,有几十种抗菌药物筛选技术可用,每个都有不同的优点和缺点。抗菌产品筛选,如果你的公司感兴趣请联系Microchem更多信息,和自由协商的方法将为您的项目提供最大的价值。
