ASTM E1052试验总结

ASTM E1052:悬浮液中杀菌剂对杀菌剂活性的评估标准规程

• 将冷冻库存测试病毒解冻并稀释至约6-log滴度₁₀感染单位每0.1毫升。
• 如果研究主办方要求，将测试病毒装入适当水平的有机土壤中。当测试产品打算作为一步消毒产品上市时，通常会这样做。
  • EPA要求一步消毒的有机土壤负荷为5%。
• 试验产品按研究主办方指定的使用稀释度配制，如适用。准备等量缓冲盐水或细胞培养基作为病毒恢复对照。
• 将制备好的接种物按1份病毒+ 9份测试产品(按本方法)的比例添加到测试产品和病毒恢复控制培养基中。
• 在研究接触时间结束后，用最适合于测试物质中存在的活性成分的方法中和试验和回收悬浮液，例如稀释到化学中和剂中或通过sepacryl凝胶柱过滤。
• 以与试验悬浮液相同的方式中和试验物质的使用稀释的另一部分。这是用来产生细胞毒性控制，以确定最低稀释度，如果有，测试物质对宿主细胞造成损害。
• 从细胞毒性对照中除去一个异卵，并用低浓度的病毒悬液接种。这用于生成中和控制，以确认所选中和方法的有效性。
• 中和试验、恢复、细胞毒性控制和中和控制悬液在适当的培养基中连续稀释。每一种稀释液被镀四份，在24孔托盘中宿主细胞单层。将培养基添加到每个孔中，让宿主细胞-病毒系统孵育适当的时间。
• 在孵育时间结束时，使用标准细胞培养方法对测定结果进行评分。
  • 在显微镜下检查托盘中的每孔是否存在感染的细胞病变效应(CPE)。检查细胞毒性控制孔，以确定试验产品所造成的损害。必要时使用验证性化验。
  • 斯皮尔曼-卡伯(Spearman-Karber)方法或另一种适当的统计方法被用于定量分析中存在的传染性病毒的数量。

杀病毒效果成功标准

• 至少4-log₁₀每0.1毫升的感染单位必须从病毒恢复控制中恢复。
• 在试验的所有稀释度下，使试验病毒完全失活。

ASTM E1052悬挂时间阻断方法的优点

• 在一项研究中，几种活性成分的浓度可以在不同接触时间内高效、快速地进行评估。
• 该测试方法比大多数硬表面载体方法更易于再现。

ASTM E1052悬挂时间抑制方法的弱点

• 检测的指定混合比例(1份病毒+ 9份检测产品)可能导致稀释，人为降低产品的功效，特别是对即食配方。
• 针对病毒悬浮液配方产生的数据可能无法转化为对坚硬、无孔表面干燥病毒膜的疗效。

根据美国EPA和FDA标准，可以在微化学实验室作为一个简单的筛选(非GLP)，并在更全面的GLP研究条件下进行病毒悬液时间杀伤试验。2022足球世界杯32强